干货丨PCR功能简介

*，PCR仪又称热循环仪，是配合PCR过程的变温仪器，热盖是仪器上方的一部分，用来避免样品在高温环境下蒸发冷凝在管盖上而减少反应样品体积的风险。

PCR又称聚合酶链反应，是体外扩增目的DNA片段的方法，在多方面广泛应用，主要分为三大步骤：高温变性、低温退火、适温延伸。分别添加引物、模板、Taq酶、dNTP和缓冲液等反应物混合，在约为95℃环境下，双链DNA氢键断裂解旋为单链；单链与人工设计的引物在约为60℃温度下，按照碱基互补配对的原则相结合；并升温到72℃左右，利用Taq酶延伸合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

在此过程中，某段温度会接近或高于100℃，部分样品会随着高温向上蒸发，遇上温度较低的PCR管盖，则会冷凝在管盖上，管内的样品就会有一定损失，少一部分没有参加循环，造成样品得率降低。

在此之前仪器还不具备这个装置，是通过样品里滴加石蜡油来解决此问题的，但实际上后续对石蜡油的处理较为繁琐。后续热盖的出现能够有效避免该风险，热盖的温度一般都会比模块高5-10℃，这样模块内的PCR管上端温度始终大于反应液的温度，由于高温处压强大于低温处压强，液体不会向上蒸发，于是所有的样品反应液体积不会发生变化。

但由于样品管的高度不一，早期的仪器不可调热盖只能用于统一高度的样品管，当使用较矮的样品管时，需要加入铝块，较为麻烦；目前可调式热盖分为旋钮式和自调节式等：有些仪器旋钮式热盖的高度和压力是根据样品管可调整：但换样之前需要将旋钮旋回原位。并且存在压力不好控制的问题：过紧会使样品管变性等；过松则无法达到相应温度影响结果。自调节则可根据样品管高低调节高度。